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網(wǎng)站首頁技術(shù)文章 ◇ 實驗室分光光度計測量條件的選擇參照兩個方面
實驗室分光光度計測量條件的選擇參照兩個方面
更新時間:2020-08-27 點擊次數(shù):1776次
   實驗室分光光度計是實驗室檢測核酸或者蛋白樣品濃度常用的工具之一。儀器使用頻繁,但甚少見到有人維護。其實,保持分光光度計清潔、無污染是成功操作的關(guān)鍵。適合從紫外光區(qū)到可見光區(qū)的測定,支持單機、聯(lián)機2種模式,單機狀態(tài)下使用機內(nèi)微機系統(tǒng)提供熒光強度測量、濃度直讀、自動調(diào)零、自動扣除背景等功能,聯(lián)機狀態(tài)可通過USB2.0接口使用上層軟件對儀器進行控制和數(shù)據(jù)采集分析。
 
  實驗室分光光度計測量條件的選擇:
  測試波長的選擇
  當用分光光度計對溶液進行測定時,首先需要選擇合適的測量波長。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸收曲線。在一般情況下,總是選擇較大吸收波長作為測量波長,這樣可以提高靈敏度。
 
  而在有些情況下較大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在,就不能選較大吸收波長,而須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線中的其它波長進行測定(曲線較平坦處對應(yīng)的波長),以消除干擾。繪制吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。
 
  參比溶液和溶荊的選擇
  分光光度計的測量實際上是以通過參比池的光強度作為人射光強度來測定試樣的吸光度,先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零,然后讓同一束光通過樣品,使得吸光度比較真實地反映待測物質(zhì)的濃度,所以參比溶液的選擇非常重要。
 
  如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收,可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色,并在測定波長下有吸收,則用顯色劑溶液作參比溶液,所加人顯色劑及其它試劑的量,與試樣中的加入量應(yīng)一致。
 
  如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾,而所用顯色劑沒顏色,則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。
 
  正確選擇合適的溶劑,對提高分析的準確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響,應(yīng)選擇高純度的溶劑;溶劑應(yīng)不與待測物質(zhì)發(fā)生化學反應(yīng);待測物在溶劑中要有一定的溶解度;在測定的波長范圍內(nèi),溶劑本身沒有吸收,注意常用溶劑的較短可用波長;當用揮發(fā)性大的溶劑時,測量過程中吸收池應(yīng)加蓋。
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