數(shù)顯可見分光光度計(jì)是一種常用的光譜分析儀器。其主要原理是在選擇性吸收現(xiàn)象基礎(chǔ)上測(cè)量物質(zhì)的濃度，該原理也被稱為比色法。經(jīng)過樣品的光線受到吸收后，產(chǎn)生一個(gè)比原來較弱的帶有物質(zhì)色彩特征的光譜?？梢姽鈪^(qū)域的波長(zhǎng)范圍通常是400-800nm，因此數(shù)顯可見分光光度計(jì)使用濾波片選擇準(zhǔn)確的波長(zhǎng)范圍，將寬譜默認(rèn)為單一波長(zhǎng)，即所選范圍內(nèi)的某個(gè)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量。適用于化學(xué)、生物、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。其主要用途包括測(cè)定水溶液中某種離子、有機(jī)化合物、蛋白質(zhì)、肽類以及酶的活性等。
樣品中物質(zhì)吸收的程度與其濃度成正比，數(shù)顯可見分光光度計(jì)通過對(duì)透射光和進(jìn)入樣品前的光強(qiáng)進(jìn)行比較，測(cè)定了樣品中物質(zhì)的吸光度。高濃度樣品的吸光度較大，而低濃度樣品的吸光度則較小。主要由光源、狹縫、棱鏡(或光柵)、濾波片、檢測(cè)器和顯示器組成。光源產(chǎn)生可見光，并將其發(fā)射至狹縫處。狹縫起到減少入射的光束寬度的作用，使它們成為平行的光線。由棱鏡(或光柵)引導(dǎo)的光束，被分散成多條波長(zhǎng)不同的光譜，形成一個(gè)彩色圖像，接著選擇合適的濾波片進(jìn)行過濾，只留下與該物質(zhì)吸收峰匹配的波長(zhǎng)。光線經(jīng)過樣品(通常放置在立方體玻璃池中)，吸收一部分后穿過檢測(cè)器，檢測(cè)器轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。電信號(hào)被顯示器解釋和表示，并通過計(jì)算濃度值來確定樣品中要測(cè)定物質(zhì)的含量。
使用數(shù)顯可見分光光度計(jì)測(cè)量樣品的方法主要包括以下幾個(gè)步驟：
1.打開儀器電源，按下預(yù)熱鍵。一般情況下，預(yù)熱時(shí)間為15-30分鐘，預(yù)熱完成后屏幕上會(huì)顯示出“OK”提示。
2.將試管架空載入儀器中，關(guān)閉光源調(diào)節(jié)旋鈕并將光程旋鈕調(diào)成大值。此時(shí)零位指示燈亮起，表示已進(jìn)入調(diào)零狀態(tài)。然后打開光源調(diào)節(jié)旋鈕，逐漸調(diào)節(jié)到合適的光強(qiáng)度大小，并按下ZERO鍵復(fù)位。
3.將待測(cè)樣品放入比色皿中，并放入試管架中，打開光源和檢波室開關(guān)。根據(jù)需要選擇吸光度或所需檢測(cè)波長(zhǎng)，并轉(zhuǎn)動(dòng)光程旋鈕以使測(cè)量結(jié)果好。
4.當(dāng)示波器振蕩穩(wěn)定后，記錄示值即為該樣品的吸光度。如需多次測(cè)量同一樣品，請(qǐng)重新進(jìn)行校零操作后再進(jìn)行。
5.使用完畢后應(yīng)及時(shí)清洗相關(guān)部件，避免交叉污染和對(duì)儀器造成損害。
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